1.2.2微生物的选择培养和计数-(共30张PPT)课件人教版2019选择性必修3

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ID：11-19524477

版本：人教版（2019）

类型：课件

地区：全国

文件：35.6MB

日期：2024-03-18

作者：21jy_6422580045

星级：2

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第1章　发酵工程人教版高中生物选择性必修3 微生物的培养技术及应用2 科学探究、科学思维通过对土壤中分解尿素的细菌进行分离和计数，理解并掌握微生物计数的方法。生命观念通过实例，理解各类微生物都能适应其生活环境。社会责任根据微生物的代谢类型，配制选择培养基，总结分离微生物的过程和测定微生物数量的常用方法。目标要求从生活中来 1973年，科学家从美国黄石国家公园的热泉中筛选出水生栖热菌，进而从这种菌中提取出耐高温的DNA聚合酶。这种酶已被广泛用于体外扩增DNA片段。以上实例对我们从众多微生物中分离出需要的特定的微生物有何启示？选择培养基 1. 概念：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。 2.原理：人为提供有利于目的菌生长的条件（包括营养、温度和PH等），同时抑制或阻止其他微生物的生长。课外拓展加入某些特定的物质（创造特殊环境）加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌加高浓度食盐分离得到金黄色葡萄球菌改变培养基的营养成分培养基缺乏氮源时可分离自生固氮微生物培养基缺乏有机碳源时异养微生物无法生存，而自养微生物可利用空气中的CO2制造有机物而生存。在高温环境中可分离得到耐高温微生物课外拓展利用培养基“特定化学成分”分离当石油为唯一碳源时当尿素是唯一氮源时当以纤维素为唯一碳源时不能利用石油的微生物不能生存，能够利用石油的微生物能生存，从而分离出能降解石油的微生物。不能利用尿素的微生物因缺乏氮源而不能正常生长，能够分解尿素的微生物能利用尿素作为氮源而正常生长。能分解纤维素的微生物具有更多的生存机会而大量繁殖。选择培养基如何证明一个选择培养基具有选择性？设置基础培养基（如牛肉膏蛋白胨培养基）或完全培养基作为对照，若基础培养基或完全培养基中生长的菌落数多于该选择培养基，则该选择培养基具有选择性。基础培养基选择培养基微生物的选择培养研究课题：1 g 土壤中有多少能分解尿素的细菌分离：获得尿素分解菌的纯培养物计数：测定尿素分解菌数量微生物的选择培养土壤取样样品的稀释涂布平板微生物的培养与观察土壤微生物存在土壤中，怎么选择合适的土壤？土壤收集后能不能直接倒入平板内培养？该怎么操作？取土样时用的铁铲和取样袋在使用前都需要灭菌。操作完成后，一定要洗手。微生物的选择培养土壤取样样品的稀释涂布平板微生物的培养与观察 1×10 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL 102 103 104 105 106 107 10g 9 mL 无菌水 90mL无菌水微生物的选择培养土壤取样样品的稀释涂布平板微生物的培养与观察 1×10 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL 102 103 104 105 106 107 10g 9 mL 无菌水 90mL无菌水测定细菌 1ⅹ104、 1ⅹ105、1ⅹ106 测定放线菌 1ⅹ103、 1ⅹ104、1ⅹ105 测定真菌 1ⅹ102、 1ⅹ103、1ⅹ104 微生物的选择培养样品的稀释涂布平板微生物的培养与观察土壤取样取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽，涂布器冷却后，再进行涂布。用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。微生物的选择培养样品的稀释涂布平板微生物的培养与观察土壤取样取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽，涂布器冷却后，再进行涂布。用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。每个稀释度下应涂布几个平板？为什么？本实验用了多少培养基平板吗？分别是什么类型？微生物的选择培养涂布平板未接种的牛肉膏蛋白胨培养基平板一个未接种的选择培养基平板一个 102 103 104 105 106 不同稀释倍数的已接种的牛肉膏蛋白胨培养基各一个 102 103 104 105 106 不同稀释倍数的已接种的选择培养基每种稀释倍数至少3个减少实验误差,保证实验结果更准确微生物的选择培养样品的稀释涂布平板微生物的培养与观察待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置（同时放一个未接种的培养基），放入30~37℃的恒温培养箱中培养1~2d。土壤取样稀释103倍稀释104倍稀释105倍空白对照微生物的选择培养实验结果未接种的牛肉膏蛋白胨培养基未接种的选择培养基微生物的选择培养实验结果未接种的牛肉膏蛋白胨培养基未接种的选择培养基 102 选择培养基 102 牛肉膏蛋白胨培养基 103 选择培养基 103 牛肉膏蛋白胨培养基 104 选择培养基 104 牛肉膏蛋白胨培养基 105 选择培养基 105 牛肉膏蛋白胨培养基 106 选择培养基 106 牛肉膏蛋白胨培养基微生物的选择培养课题延伸 pH升高指示剂（酚红）将变红在以尿素为唯一氮源的培养基上加入酚红指示剂，培养某种细菌后，若pH升高，指示剂将变红，这样说明该菌能够分解尿素。怎样判断筛选出来菌就是能够分解尿素的菌呢？可以用什么去鉴定呢？ CO(NH2)2+H2O CO2+2NH3 脲酶微生物的选择培养将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面的方法。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。获得单菌落——稀释涂布平板法微生物的选择培养稀释涂布平板法和平板划线法的比较想一想微生物的选择培养 {3C2FFA5D-87B4-456A-9821-1D502468CF0F}主要方法稀释涂布平板法平板划线法主要步骤接种工具菌体获取能否用于计数共同点梯度稀释、涂布平板操作接种环在固体培养基表面连续划线涂布器接种环从适宜稀释度的平板上的菌落中挑取菌体在具有显著的菌落特征的区域挑取菌体可以计数，但是操作复杂，需涂布多个平板不能计数使培养基上形成由单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体—菌落微生物的数量测定稀释涂布平板法进行计数原理是什么？为什么可以用于细菌的计数？稀释涂布平板法进行计数有什么注意事项？通过稀释涂布平板法统计的细菌的数目与它的实际数目相同吗？用显微镜进行直接计数统计细菌的数目与它的实的际数目相同吗? 想一想显微镜进行直接计数与稀释涂布平板法计数优缺点？微生物的数量测定 1 稀释涂布平板计数法 —间接计数法 —直接计数法 2 显微镜直接计数法微生物的数量测定 1 稀释涂布平板计数法 1. 原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，可推测出样品中大约有多少活菌。稀释103倍稀释104倍稀释105倍空白对照 2. 计数原则：选择30-300个菌落的平板进行计数；每个稀释度至少取3个平板取其平均值；统计的菌落往往比活菌的实际数目低；统计的结果一般用菌落数而不是活菌数；恰当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键。微生物的数量测定 3. 计算公式： M代表稀释倍数其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL) 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M 菌落数 52 菌落数 63 菌落数 77 105 1 稀释涂布平板计数法微生物的数量测定 2 显微镜直接计数法利用细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。血细胞计数板常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数。细菌计数板对细菌等较小的细胞进行观察和计数。 1. 原理： 2. 计数工具：微生物的数量测定血细胞计数板 2 显微镜直接计数法微生物的数量测定 2 显微镜直接计数法微生物的数量测定 2 显微镜直接计数法方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供计数用。中方格小方格（双线分割）大方格边长为1mm，深度为0.1mm 1个计数室的体积为0.1mm3。 1个计数室有400个小方格。每个小方格的体积是1/4000mm3。 1mL培养液所含菌数＝每小格平均菌数×400×104×稀释倍数微生物的数量测定优点：缺点： 2 显微镜直接计数法快速、直观 ①不能区分死菌和活菌→统计值偏大 ②不适于对运动细菌的计数 ③个体小的细菌在显微镜下难以观察 3. 可以染色（如使用台盼蓝，死细胞会被染成蓝色）后再进行显微镜计数。